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超凈工作臺在康乃馨的離體快繁的應(yīng)用

一、 儀器設(shè)備和試劑

超凈工作臺、帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿，無菌水

培養(yǎng)基 N6+1 mg/L 6-BA

剪刀、槍型鑷子

量筒、酒精燈、濾紙、蒸餾水、小刷子

95%乙醇、70%酒精、70%酒精棉球、0.2%升汞、甲醛、高錳酸鉀、來蘇爾

紗布、棉塞、牛皮紙、才培純、肥皂、酒精噴壺

植物的嫩莖、側(cè)芽、莖尖、葉片、花、愈傷組織上的不定芽、胚狀體、試管苗等

二、實驗材料 康乃馨枝條

三、方法和步驟

1 外植體滅菌 取從市場上購買的康乃馨枝條，去掉大的葉片，剪取帶腋芽的節(jié)結(jié)，用肥皂（洗潔精）清洗表面，再用自來水沖洗 30-60分鐘，然后在無菌室（超凈工作臺）內(nèi)用70%酒精浸沒20-40秒鐘（根據(jù)材料的木質(zhì)化程度掌握具體的浸沒時間。用0.2% 的升汞溶液浸泡10-15分鐘，再用無菌水沖洗3-4次，放入已滅菌的培養(yǎng)皿中的濾紙上待用。

2 接種 先進行無菌室內(nèi)消毒，用紫外燈照射30-45分鐘，地面用低濃度的來蘇爾溶液消毒，紫外燈關(guān)閉約20分鐘后方可進去工作。

超凈工作臺消毒 開啟無菌風開關(guān)，讓無菌風吹上30-45分鐘后方可工作。并用70%的酒精棉球擦凈工作臺。

接種時先點燃酒精燈，鑷子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精燈上灼燒好冷卻后的鑷子、剪刀取出一個側(cè)芽或小段莖，迅速打開三角瓶口，將材料才插入瓶內(nèi)，注意材料上下端的極性，不能倒插。在酒精燈邊塞回錫箔紙，用記號筆在瓶體上寫明日期和材料。

3 培養(yǎng)條件： 25℃光照13小時/天 光強1000 Lux

4 繼代培養(yǎng)（見下一個實驗）

5 誘導生根：用低濃度的吲哚乙酸或者萘乙酸或無激素的N6培養(yǎng)基誘導生根

6 試管苗移栽〈參見有關(guān)其它實驗〉

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